這些你必須了解的ELISA試劑盒測定技術的發(fā)展過程

ELISA試劑盒試驗是一種敏感性高，特異性強，重復性好的實驗診斷方法。Elisa試劑盒臨床測定技術發(fā)展主要用于方法學的發(fā)展，而Elisa試劑盒使用方法學的發(fā)展依托于試劑生產(chǎn)技術不斷進步更新和型標記物的應用。目前，分子生物學正在并zui終肯定會讓我們對整個生命科學有一個全面而*的認識，其對免疫測定技術發(fā)展的影響也是直接而又有效的，它使我們對以前一些難以檢測的生物活性物質的測定變得輕而易舉，并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性，由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便，結果判斷較客觀等因素，已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。
1、 基因工程酶及其融合蛋白
除了基因工程抗原、抗體外，與標記免疫測定有關的另一中重要的基因工程試劑就是酶及其融合蛋白，以重組酶建立免疫測定方法較為成功的是CEDIATM均相酶免疫試驗。
使用基因工程酶技術生產(chǎn)免疫測定標記酶，是得到符合標記要求的高純度酶的一條新途徑，但如以其他蛋白（抗原或抗體）融合的方法，不但避免了繁瑣且低效率的酶與蛋白的化學交聯(lián)，而且無需得到純化的酶和抗原或抗體。隨著分子生物學技術的發(fā)展，將有越來越多的酶免疫測定方法建立在基因工程酶或其融合蛋白的基礎之上。
2、ELISA試劑盒基因工程抗體及其功能試劑
80年代后人們開始使用基因工程技術制備抗體，并進而將抗體分子片斷與其它蛋白（或另一種抗體分子）融合得到多功能試劑，到目前為止，基因工程抗體在免疫測定上的應用尚處于一個初級階段。且主要是將抗體與其它蛋白以融合蛋白形式表達而得到多功能試劑，如澳大利亞學者應用基因工程技術制備了抗人紅細胞抗體與HIV-1gpN41的融合蛋白。這種重組蛋白，即基因工程雙功能試劑，在此基礎上，建立了快速，靈敏和特異的自身紅細胞凝集試驗（AGEN）.
3、基因工程
較早用于免疫測定的基因工程抗原是HBcAg和HBsAg,這兩種基因工程抗原的出現(xiàn)，較好地解決了抗HBc和HBe的測定問題。因為要從病毒本身去大量獲取這兩種純抗原較為困難，并且這一點對于難培養(yǎng)的病原微生物來說，如HIV、HCV和梅毒螺旋體等都有些共性。
4、基因工程試劑對免疫測定技術發(fā)展的影響
ELISA試劑盒免疫測定技術的基礎在于抗原抗體之間的特異結合反應，所以任何的診斷試劑離不開的原料，如抗原抗體，酶等。以前用于免疫測定的抗原通常為各種純化抗原，而抗體則為純化抗原免疫動物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術得到的單克隆抗體，而抗原或抗體的標記物如酶標結合物則通過各總化學合成方法制備。近年來，隨著分子生物學的發(fā)展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結合物等免疫測定試劑幾成為現(xiàn)實的新一代試劑，各種新型使用的測定方法也不斷出現(xiàn)。