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      免疫組化染色具體操作步驟

      發布時間: 2018-06-29  點擊次數: 1753次

      免疫組化染色具體操作步驟介紹
      (以美國ZYMED公司SP試劑盒為例)
      1、石蠟切片脫蠟至水。
      2、3%H2O2室溫孵育5~10分鐘,以消除內源性過氧化物酶的活性。
      3、蒸餾水沖洗,PBS浸泡5分鐘,(如需采用抗原修復,可在此步后進行)。
      4、 5~10%正常山羊血清(PBS稀釋)封閉,室溫孵育10分鐘。傾去血清,勿洗,滴加適當比例稀釋的一抗或一抗工作液,37℃孵育1~2小時或4℃。
      5、PBS沖洗,5分鐘×3次。
      6、滴加適當比例稀釋的生物素標記二抗(1%BSA-PBS稀釋),37℃孵育10~30分鐘;或滴加第二代生物素標記二抗工作液,37℃或室溫孵育10~30分鐘。
      7、PBS沖洗,5分鐘×3次。
      8、滴加適當比例稀釋的辣根酶標記鏈霉卵白素(PBS稀釋),37℃孵育10~30分鐘;或第二代辣根酶標記鏈霉卵白素工作液,37℃或室溫孵育10~30分鐘。
      9、PBS沖洗,5分鐘×3次。
      10、顯色劑顯色(DAB或AEC)。
      11、自來水充分沖洗,復染,封片。
      12、冰凍切片免疫組化染色步驟
      13、冰凍切片4~8mm,室溫放置30分鐘后,入4℃丙酮固定10分鐘,PBS洗,5分鐘×3.用3%過氧化氫孵育5~10分鐘,消除內源性過氧化物酶的活性。PBS洗,5分鐘×2。

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