蛋白質與國產ELISA試劑盒相互作用的研究

國產ELISA試劑盒與蛋白質是生命活動的執(zhí)行者，細胞內的生理變化都是通過蛋白質來實現(xiàn)的。但是生命活動中各項功能和行為不是由單一的蛋白質來完成的，需要蛋白質與蛋白質，蛋白質與核酸之間的相互作用來實現(xiàn)的。蛋白-蛋白互作網(wǎng)絡與轉錄調控網(wǎng)絡對調控細胞及其信號有重要意義。于是對于蛋白之間相互作用的研究也變的很重要，關于研究方法也是層出不窮。

 在我們實驗研究的過程中主要用到以下幾種技術：
1.酵母雙雜交（Y2H）
2.Pull-down技術
3.免疫共沉淀技術（Co-IP）
4.亞細胞共定位技術
5.噬菌體展示技術（PDT）
6.熒光共振能量轉移技術（FRET）
7.雙分子熒光互補技術（BIFC）

其中實驗室比較常用的研究方法主要是前三種。這里對酵母雙雜交技術略作介紹和評述。

原理：
酵母雙雜交系統(tǒng)由Fields和Song等首先在研究真核基因轉錄調控中建立的。酵母的半乳糖苷酶基因的轉錄激活因子GL4有兩個獨立的結構域 ：N末端的DNA結合域（BD）和C末端的轉錄激活域（AD）。BD與DNA分子結合，AD激活下游基因的轉錄，國產ELISA試劑盒只有兩者在空間上充分接近才能激活下游基因的轉錄。于是將要研究的兩個蛋白分別與BD和AD融合，如果兩個蛋白有相互作用則AD和BD在空間上會接近進而激活下游報告基因的轉錄。

操作步驟：
（1）首先構建已知蛋白的cDNA序列為誘餌，與DNA結合域融合（2）將待篩選的蛋白的cDNA序列與轉錄激活域融合，構建成文庫質粒（3）將這兩個質粒共轉化到酵母細胞中（4）通過檢測下游報告基因的表達篩選或確認蛋白相互作用。

優(yōu)缺點：
優(yōu)點：是可以在文庫中可以高通量篩選與目的蛋白相互作用的蛋白缺點：是假陽性多，還需要其他方法相互印證，國產ELISA試劑盒不適用于所有的蛋白