研域干貨：常見ELISA試劑盒試驗(yàn)技能要點(diǎn)

1. 準(zhǔn)備好所有試驗(yàn)額定所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機(jī)等；

2. 依據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確認(rèn)所需試劑的量；

3. 按闡明書將所用試劑平衡至室溫，制造所需試劑；

4. 標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備，盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法試驗(yàn)者，留意低溫保存。

試驗(yàn)中為了確認(rèn)信號(hào)和背景應(yīng)將捕獲抗體（0.5-4μg/ml）和檢測(cè)抗體（0.25-2μg/ml）在預(yù)試驗(yàn)中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時(shí)，應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的規(guī)范品的系列稀釋。按試劑闡明書慣例供給的范圍進(jìn)行操作。

規(guī)范品的制造：對(duì)于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀闡明書，留意每批的細(xì)節(jié)。在運(yùn)用細(xì)胞因子前，瞬時(shí)離心試劑瓶，盡可能多地回收其間的細(xì)胞因子。依據(jù)每批闡明書中的細(xì)節(jié)，將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。

為了優(yōu)化靈敏度，主張過夜孵育規(guī)范品和標(biāo)本。若運(yùn)用過氧化物酶作為顯色體系，應(yīng)禁止在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。當(dāng)測(cè)定混合液體中的抗原時(shí)，如血清，主張?jiān)跇?biāo)本稀釋液中加不相干的Ig。