激光顯微細(xì)胞分離技術(shù)

激光顯微細(xì)胞分離技術(shù)
美國(guó)國(guó)立健康研究院腫瘤研究所病理研究室與生物醫(yī)學(xué)設(shè)備組合作研發(fā)激光俘獲顯微切割技術(shù)，發(fā)展為Acturus 的PixCell II系統(tǒng)。在操作這套系統(tǒng)時(shí)，首先在組織切片上覆蓋一層透明的膜，在顯微鏡下觀察該組織切片，選擇某一特殊細(xì)胞后，開啟脈沖式紅外激光束，使膜融化變得粘性很強(qiáng)（該膜的成份為 Ethylene Vinyl Acetate Polymer），等到冷卻后將該位置的細(xì)胞牢固地粘附在上面從而分離細(xì)胞。
該種方法較以往方法改進(jìn)之處：首先，它簡(jiǎn)單，不需要移動(dòng)任何切片部位，一步即可完成從組織中分離特殊細(xì)胞，這些在膜上的細(xì)胞依然保持其原有的形態(tài)，使用無(wú)菌、一次性的膜可zui大限度地避免可能的污染。這對(duì)于后續(xù)進(jìn)行PCR檢測(cè)是尤為重要的。其次，使膜活化所需的激光能量很小（<50mW），與常規(guī)顯微配合是充足的，完夠滿足臨床病理組織細(xì)胞顯微分離的需要。再者，LCM技術(shù)分離細(xì)胞速度較以往方法有很大提高，例如，從腎組織切片中分離一個(gè)腎小球（Glomerulus）所需時(shí)間小于10秒，一小時(shí)內(nèi)即可輕松地分離上百個(gè)腎小球。
神經(jīng)系統(tǒng)主要由兩類細(xì)胞組成：神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞。在腦內(nèi)，不同解剖區(qū)域行使不同功能，這里所講的解剖區(qū)域是指核團(tuán)。核團(tuán)在顯微鏡下才可以辨別，是相對(duì)集中在一個(gè)區(qū)域的可能行使一定功能的神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞的集合體。把某個(gè)核團(tuán)從腦內(nèi)取出來(lái)是不太現(xiàn)實(shí)的。腦內(nèi)核團(tuán)數(shù)以百計(jì)，如果要想研究基因在腦內(nèi)核團(tuán)的表達(dá)水平，在以前只能用原位雜交技術(shù)。
如果要想研究蛋白質(zhì)的表達(dá)水平或磷酸化等狀態(tài)，只能用免疫組織化學(xué)技術(shù)。而這兩個(gè)技術(shù)雖然能定位基因或蛋白質(zhì)在腦內(nèi)核團(tuán)的表達(dá)情況,缺點(diǎn)是通量小。
因此，如果研究者主要是為了研究很多種基因在特定核團(tuán)的神經(jīng)元或膠質(zhì)細(xì)胞的表達(dá)情況，新的解決方案之一就是組合LCM技術(shù)、RNA擴(kuò)增技術(shù)和基因芯片技術(shù)。即利用LCM技術(shù)將特定核團(tuán)的神經(jīng)元或膠質(zhì)細(xì)胞取出，提取總RNA或mRNA，RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA并進(jìn)行擴(kuò)增.zui后將cDNA標(biāo)記為探針，和基因芯片雜交。如果研究的基因種類數(shù)不多，那么也可以只提取LCM獲得的細(xì)胞的總RNA，利用定量RT-PCR技術(shù)來(lái)進(jìn)行基因表達(dá)分析。

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