冷凍切片原理及其制作方法分析

    冷凍切片是利用物理降溫的方法將新鮮的組織標本冷凍使其產(chǎn)生一定的硬度進行切片的技術(shù)方法。與石蠟切片相比，由于冷凍切片不需脫水包埋因此制片速度 快，是為手術(shù)進行中的臨床醫(yī)師提供病理診斷的良好方法。ELISA試劑盒此外由于冷凍切片的標本是未經(jīng)固定的新鮮組織，因此冷凍切片也是脂肪染色、酶組織化學染色以及某些 免疫組織化學染色和原位分子雜交的理想制片方法。冷凍切片的不足是組織細胞的形態(tài)略遜于石蠟切片。

二、冷凍切片的制作方法

利用氯乙烷噴灑、二氧化碳噴射、半導體制冷的方法均可制作普通的冷凍切片，用于術(shù)中的病理診斷。恒冷箱冷凍切片機可以制作適用于各種目地的冷凍切片，是目前zui為常用的理想冷凍切片制片方式。

1.冷凍切片的技術(shù)操作方法

(1)將恒冷箱冷凍切片機的速凍頭和箱內(nèi)溫度調(diào)整到適宜的切溫度，一般情況下為一18～一25℃。
(2)在標本冷凍托上涂布一層冷凍包埋劑一OCT，然后將取材后新鮮標本安放在標本冷凍托上并用OCT覆蓋標本。
(3)標本冷凍完成后將標本托固定在切片機的機頭上，調(diào)整機頭位置使其恰好位于切片刀的后方。
(4)使用粗切削方式進行標本的粗切削至暴露標本的zui大平面，ELISA試劑盒使用自動推進方式連續(xù)切削2～3刀后用毛筆清除機頭、標本托及切片刀上的組織碎屑。
(5)調(diào)整并確認切片的厚度，一般為4～8 um，染脂肪和神經(jīng)組織應控制在12~25 um。
(6)放下防卷板使防卷板的位置恰好與切片刀的刀刃*平行并略突出于刀刃。
(7)以自動推進的方式進行切片，良好的切片將在防卷板的下方形成一張完整平整的薄片，如切片略有彎曲可用小毛筆輕輕展平切片。
(8)打開防卷板，用載玻片平穩(wěn)地輕壓切片使其平整地吸附到載玻片上。

三、冷凍切片的染色

切好的冷凍切片立即投入丙酮中進行固定，一般固定1～2 min即可進行染色，用于免疫組化染色的冷凍切片應在切片略干時即刻投入冷甲醇中固定10~15 rmin然后進行相應的組織化學染色程序。

1．冷凍切片的HE染色程序。

(1)切片在丙酮中固定1～2 min。
(2)水洗5 s。
(3)使用新鮮的Harris蘇木精染液染細胞核2min。
(4)水洗5 s。
(5)在0.5％的鹽酸乙醇液中分化1～3 s。
(6)水洗5 s。
(7)在0.5％～1％的伊紅染液中染細胞質(zhì)20~30 s。
(8)水洗5 s。
(9)在95％乙醇I、95％乙醇Ⅱ、100％乙醇I、ELISA試劑盒100％乙醇Ⅱ、中逐級脫水各3～5 s。
(10)甲苯I、二甲苯Ⅱ透明各5 s。
(11)干組織周圍的二甲苯，在二甲苯尚未干燥前滴加光學樹脂膠封片。